Integrative Genomics Viewer(IGV)是一种高性能、易于使用的交互式工具,用于对基因组数据进行可视化探索。它支持所有常见类型的基因组数据和元数据的灵活集成。
IGV支持二代测序,芯片测序数据和基因组数据等各种大型数据集的可视化;可用于展示和查看基因表达差异、突变、融合、甲基化、探针等多种信息。
01如何下载安装
官网下载地址:
https://igv.org/doc/desktop/#DownloadPage/
根据自己的电脑选择对应的MacOS/Windows/Linux版本进行安装,推荐直接安装Java included的版本;非Java included版本需要配置对应的Java。
下载到指定位置后双击IGV_Win_2.17.2-WithJava-installer.exe,按照提示安装就可以啦。刚下载好的IGV打开如下图:
02数据导航
1、加载基因组
根据自己的样本物种信息,选择对应的基因组,如果是人的话,可以选择Human(GRCh38/hg38)或者Human(hg19)(最新);如果是其他物种的话,可以点击Click for more选择对应的物种和基因组版本。
选择好对应的参考基因组后,加载需要一会儿时间,所以需要耐心等待一会儿哦。加载好基因组后,页面会显示对应的基因组版本信息,染色体信息,和基因密度条形图。
2、CHip-seq数据查看
然后我们可以加载我们的样本数据,可以从Load from file......加载电脑本地文件;(此次演示使用了官方示例文件)
加载好数据后,会在工作区显示每个样本的代表组蛋白修饰信号强度的条形图。可以通过下拉列表选择其中一个染色体单独来看,或双击基因组标尺上的染色体号来看其中某个个染色体,all代表所有的染色体,即全基因组水平。
当一直放大,可以看到具体某个基因的情况,如果有目标基因,我们也可以在搜索区输入基因的名字来搜索。也可以通过右上角的“-”号和“+”号来缩小和放大可视范围。如果想看可视区旁边的区域,也可以左右拖动工作区来实现。
如果想看该基因的剪接变体,可右键点击该基因,然后选择Expanded。如果不想看剪接变体,选择Collapsed。如下图,我们可以看到基因METTL13有3个可变剪切体。;并且5’端UTR和第一个外显子的剪接方式不同。
当我们继续放大,我们将看到参考的核苷酸,点击任意核苷酸,可看到其对应的氨基酸。
3、bam数据查看
当加载bam文件时,和bam相同路径下要有对应的bam索引文件,格式为.bam.bai。由于bam数据交大,加载需要一定的时间。刚加载好数据后,我们在工作区看不到任何reads,这是因为IGV在较大的缩放级别上隐藏了reads,以节省内存。
当我们不断放大,就可以聚焦reads了。放大后我们可以在工作区看到有很多灰色和白色的条形,每个条形代表一个reads,每个reads都与参考基因组上特定的位置对齐。
白色的reads是比对质量为0的reads,灰色的reads为比对质量非0的reads。reads的上方有一条Coverage轨道。轨道中对应的条形图是对其位置上的reads数的统计。当我们在工作区看不到全部的reads时,可以鼠标上下滚动工作区来看。
从下图,我们可以有一列绿色的A比较突出,是因为该位置的参考碱基是鸟嘌呤,而有大一部分reads上该位置是腺嘌呤;在上面的条形图也是由绿色和橙色突出。点击条形图,我们可以看到该位置上腺嘌呤和鸟嘌呤的占比。
另外我们可以看到有些碱基的颜色比较深,有些碱基的颜色比较浅,如下图的T和G,分别点击T和G我们可以看到,颜色深的T碱基质量为18,颜色浅的G碱基质量为10,颜色越深代表碱基质量越高,越不可能是错配碱基。
紫色的Ⅰ代表插入,点击Ⅰ会显示插入的碱基。碱基的缺失,会用“—”表示。
以上我们展示了一些基础的使用方法。
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