使用NGS可进一步识别Her2低表达乳腺癌患者的分子差异，提高患者获益-CTI华测检测官方商城

基于免疫组织化学（IHC）和原位杂交（ISH）结果，出现了一种HER2低表达的乳腺癌（BC）亚型，其数量占所有BC的一半以上。如最新指南所强调的那样，人们越来越重视BC中HER2的低表达现象，并将其定义为IHC1+或IHC2+/ISH-（HER2/CEP17比值<2.0）。

然而，我们对于HER2-low乳腺癌的识别可能存在分歧。最近，有报道展示了病理学家们使用免疫组化对 HER2 进行评分的多机构评估结果：使用4类HER2 IHC评分系统观察到的中间类别（IHC1+和IHC2+）存在实质性差异，一致性分别小于1%和3.6%。同时，在IHC 评分为0的样本中差异也很大，总体一致性仅为25%。因鉴别HER2 IHC评分0和1+直到最近才具有临床意义，而确认HER2 IHC 0 到 1+ 之间的阈值受人为因素的影响，可能会导致对符合HER2低表达靶向治疗条件的患者的识别效果不佳。

本研究是对HER2低表达肿瘤结合NGS表征的概念验证、回顾性研究，使用NGS评估已接受常规 IHC ER、PR、Ki67 和HER2 表达检测乳腺癌样本的ERBB2基因扩增。同时重点关注了NGS分析的效力，识别其他具有临床意义的分子靶标，包括ESR1、PIK3CA、AKT1、ERBB2、TP53、BRCA1和BRCA2、CNV以及MSI。

背景

和激素受体（HR）、雌激素（ER）和孕激素受体（PR）表达一样，HER2表达状态也是乳腺癌（BC）诊断的标准。当使用免疫组化（IHC）进行评估时，根据染色强度、HER2阳性肿瘤细胞的百分比，以0至3+的等级对ERBB2基因编码的HER2蛋白的表达进行评分。在HER2 2+的情况下，使用原位杂交（ISH）检测HER2基因的扩增。作为参考，进行17号染色体着丝粒（CEP17）的标记，当检测到高水平的基因扩增（ERBB2/CEP17 比值 > 2.0）时，定义肿瘤为ISH阳性。

如下图所示，HER2阳性状态定义为强（3+）IHC过表达或中等（2+）IHC过表达同时基因扩增（ISH+）。10%-20%的BC为HER2阳性，HER2阳性BC患者可接受针对HER2蛋白的靶向治疗，如单克隆抗体曲妥珠单抗和帕妥珠单抗、激酶抑制剂拉帕替尼，以及抗体-药物偶联物（ADC）德曲妥珠单抗。

方法学

从洛林癌症研究所的机构肿瘤库中入组了31个FFPE BC肿瘤标本；将肿瘤固定在 4% 缓冲甲醛水溶液中至少 12 小时（活检）或24小时（手术标本），然后包埋石蜡。采用免疫组化法检测CK19、雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、HER2和Ki-67的表达。

使用定制设计的、基于捕获的“固体肿瘤溶液”试剂盒（Sophia Genetics，Geneva，Switzerland）从100ng提取的肿瘤DNA制备NGS文库，该试剂盒涵盖了51个癌症相关基因的临床关注区域，其中包括BC分子靶基因，如ESR1、PIK3CA、AKT1、ERBB2、TP53、BRCA1和BRCA2。使用MiSeq测序仪（Illumina）进行靶向测序。

结论

在一线IHC常规分析之后，NGS可以提供多个生物标志物信息及MSI状态，从而使HER2-low和TNBC患者获益，并同时节省了样本材料和时间。

结果 1：Ki67表达在Her2+的乳腺癌样本中显著升高，NGS与Fish结果具有一致性。

大多数肿瘤为激素受体阳性（29/31），定义为 ER（23/31）或 PR（23/31）表达阳性。所有肿瘤的ER/PR表达均高于10%。

HER2 IHC结果显示，所有31例样本中，10例IHC 0、5例 IHC1+、9例 IHC2+和7例 IHC3+。使用ISH进一步分析9个HER2 IHC2+肿瘤，在4/9肿瘤中观察到HER2扩增（44%）。所有分析的BC人群包括10个HER2阴性、10个HER2低表达和 11 个 HER2 阳性肿瘤。

KI67标记范围为2-80%，乳腺癌KI67标记在HER2+（IHC3+或IHC2+和ISH+）中显著高于HER2阴性（IHC0）和HER2低表达（IHC1+或 IHC2+、ISH-），平均值为 34.2（SD = 19.2）、15.8（SD = 13.4）和13.5（SD = 6.5）（如下图A）。

当使用NGS检测，HER2阳性、HER2低表达、HER2阴性肿瘤之间的ERBB2基因的CNV值有显著差异（p < 0.001），平均值分别为7.8（SD = 6.8）、1.9（SD = 0.3）和2.0（SD = 0.3）（如下图2B）。当 CNV 的临界值设置为 3.25 时，除一个样品（样品 #24）外，所有样品的 ISH 和 NGS 之间的 HER2 扩增状态一致。总之，IHC联合NGS 与IHC 联合 ISH的结果一致性为96.8%。

结果 2：NGS进一步检测出有临床意义的位点。

在19%（6/31）的病例中，HER2阴性肿瘤（2例FGFR1扩增，2例MYOD1扩增）和HER2阳性肿瘤（1例FGFR1扩增，1例PIK3CA扩增，1例ROS1扩增）同时检测到额外的基因扩增。

在68%（21/31）的病例中，有12个PIK3CA、6个TP53、2个AKT1和4个BRCA2突变，在51个基因组合中检测到其他致病性和可能的致病基因突变。

此外，在携带PIK3CA基因突变的HER2阴性、ISH未扩增、HR阳性肿瘤中检测到一例MSI 状态（c.1624G > A，p.（Glu542Lys））。

讨论

HER2低表达BC占HR+肿瘤的40%-65%，23-40%的HR阴性肿瘤表达低水平HER2。HER2的表达是动态的，并且原发肿瘤和晚期疾病之间的转化率不一致。这些结果强调，在疾病进展时进行重复活检是有用的，这可能会影响治疗选择。根据激素受体（HR）和 HER2 的表达，BC曾经被分类分为四种亚型：管腔 A（HR+和 HER2-）、管腔B（HR+和 HER2+）、HER2阳性（HR−和HER2+）和三阴性BC（TNBC、HR-和HER2-），其中TNBC通常被认为是预后最差的。HER2-low BC是HER2阴性中的一种异质性疾病，表现出DESTINY-Breast04 三期试验揭示了T-DXd在既往接受过一线或二线化疗的转移性乳腺癌患者HER2-low中的疗效，与医生选择的化疗相比，T-DXd显著增加了PFS和OS。而在DAISY试验中，即使HER2表达水平非常低，似乎也能驱动T-DXd的细胞摄取或其他独立于HER2的机制，部分参与了T-DXd的疗效。

因此，识别HER2低表达状态在BC的管理中变得至关重要，但检测方法学可能会影响 HER2、IHC 和 ISH 常规检测的敏感性和可重复性；同时应考虑HER2表达或扩增的异质性，以改善HER2低表达的识别。NGS技术的发展为乳腺癌（BC）和三阴性乳腺癌的精准医疗治疗策略带来了希望。最近在国际指南中增加的修改包括ESR1基因突变和那些仍需要验证性前瞻性研究的突变，但疗效证据可用，包括 PIK3CA、AKT1、HER2、TP53、BRCA1 。PIK3CA突变和扩增大约存在于10%的HR阳性和HER2阴性的原发性BC患者中，其扩增患者的结局较差。除了突变之外，基因扩增的鉴定也越来越受到关注。本研究中发现的一些扩增就是这种情况。最后，MSI 状态可以作为生物标志物，既存在于TNBC，也见于HER2阴性HR阳性的转移性乳腺癌患者中。在这种情况下，使用NGS同时测定对于免疫治疗很有价值。

参考文献

Merlin JL, Husson M, Sahki N, Gilson P, Massard V, Harlé A, Leroux A. Integrated Molecular Characterization of HER2-Low Breast Cancer Using Next Generation Sequencing (NGS). Biomedicines. 2023 Nov 28;11(12):3164. doi: 10.3390/biomedicines11123164. PMID: 38137385; PMCID: PMC10740754.