全国护肝日 | 破译酒精性肝炎：蛋白质组学新视角揭示临床治疗差异化策略

　　酒精相关性肝病（Alcohol-associated hepatitis，AH）与我国白酒文化颇具相关性，过量酒精摄入是导致肝病变的重要原因之一，因此对AH的临床研究具有重要现实意义。AH常用临床诊疗方案包括皮质类固醇治疗，但并非所有AH患者对皮质类固醇反应良好，约40%的患者对该治疗没有反应，如何理解这种患者群体间的反应差异尚不清楚。

　　本研究利用差异蛋白质组学技术平台，旨在分析AH患者接受皮质类固醇后，不同群体的肝脏蛋白质表达存在哪些区别。

　　01研究方法

　　1.队列构建：酒精性肝炎组（21例）与对照组（10例），其中酒精性肝炎组包含皮质类固醇治疗效果良好组（AH-R，14例）与效果不良好组（AH-NR，9例）；

　　2.TMT同位素标记蛋白质组学技术鉴定不同组间的差异蛋白；

　　3.线粒体DNA损伤检测试剂盒检测AH-R和AH-NR组血浆样本；

　　4.统计学与生物信息学分析。

　　02研究结果

　　1.在AH-NR组，糖皮质激素受体、糖皮质调节元素结合蛋白2、线粒体DNA修复酶表达水平降低；

　　2.在AH-NR组，皮质类固醇代谢酶、11-β-羟基类固醇脱氢酶1、热休克途径的几种蛋白蛋白表达水平增高；

　　3.AH-NR存活24周组，与AH-NR生存期低于24周组对比发现，急性期蛋白、凝血因子升高，并伴随肥大细胞标记蛋白降低。

　　03研究结论

　　本研究揭示了AH患者对皮质类固醇治疗不同反应的分子机制，不同群体之间存在着皮质类固醇代谢和信号通路的差异，从分子层面解释了预后不良者的基本原因。

　　AH-NR患者死亡率的上升，与凝血因子降低，肥大细胞标记物升高存在相关性，这些数据为AH治疗预后提供了一些具有临床潜在价值的生物标记物。

　　04研究结果展开

　　图1.差异蛋白质组学研究分析非AH对照组、AH-R组和AH-NR组间的肝脏蛋白组差异

　　a.临床研究中AH患者实验样本队列构建。

　　b.PCA分析展示对照（黑）、AH-R（蓝）和AH-NR（红）三组之间肝蛋白质组整体异同。

　　c.火山图显示AH-R组与对照组之间的肝蛋白质组的整体差异。

　　d.火山图显示AH-NR组与对照组之间的肝蛋白质组的整体差异。

　　e.火山图显示AH-R组与AH-NR组之间的肝蛋白质组的整体差异。

　　图2.差异蛋白质组学分析发现AH-NR患者中糖皮质激素代谢类蛋白表达增加

　　a.AH-R组与AH-NR组患者比较，肝脏中DHI1的变化极其相关ROC曲线。

　　b.AH-R组与AH-NR组患者比较，肝脏中DHI2的变化极其相关ROC曲线。

　　c.AH-R组与AH-NR组患者比较，肝脏中CP3A4的变化极其相关ROC曲线。

　　d.AH-R组与AH-NR组患者比较，肝脏中CP3A5的变化极其相关ROC曲线。

　　e.卡通图显示糖皮质激素代谢相关蛋白变化：糖皮质激素Prednisolone和Prednisone代谢过程中，在AH-NR患者组，发现DHL1蛋白升高，DHL2、CYP3A4和CYP3A5变化不大。

　　图3.差异蛋白质组学分析发现AH-NR患者中糖皮质激素信号转导受损

　　a.AH-R组与AH-NR组患者比较，肝脏中糖皮质激素受体（GCR）未发现明显变化。

　　b.AH-R组与AH-NR组患者比较，GCR转录共激活因子GMEB1与GMEB2发生变化。

　　c.热图显示三组患者的GCR靶基因在蛋白水平上的差异分析。

　　d.AH-R组与AH-NR组患者比较，GCR靶基因DDX5与CATA在蛋白表达水平上的变化。

　　图4.差异蛋白质组学分析发现AH-NR患者中热休克反应通路下调

　　a.AH-R组与AH-NR组患者比较，肝脏中热休克相关蛋白HSF1、HPBP1、RFA1和PSD10发生的变化。

　　b.卡通图展示HSF1和HPBP1的下调与错误折叠蛋白处理之间的关系，以及作为转录因子的RFA1和HSF1的下降与调节转录之间的关系。

　　图5.差异蛋白质组学分析发现AH-NR患者中线粒体DNA修复蛋白上调

　　a.AH-R组与AH-NR组患者比较，肝脏中线粒体DNA修复相关蛋白NUCG、SSBP、RNZ2和PAPD1所发生的变化。

　　b.卡通图展示四种蛋白所发生的上调变化，以及它们在线粒体DNA修复中的作用。

　　图6.差异蛋白质组学分析显示，AH-NR死亡组（AH-NR-NS）与AH-NR存活组（AH-NR-S）对比，急性期蛋白和凝血因子下调，肥大细胞标志物上调

　　b.AH-NR-NS患者组与AH-NR-S患者组比较，急性期蛋白AACT、A1AG2和AMBP的表达变化。

　　c.AH-NR-NS患者组与AH-NR-S患者组比较，凝血因子FA10、KNG1和PLMN的表达变化。

　　d.AH-NR-NS患者组与AH-NR-S患者组比较，肥大细胞标志物CMA1、TRYB1和CBPA3的表达变化。

　　05总结与启发

　　该篇文献发表于Hepatology Communications（IF>5），从这篇文章中，我们可以了解或借鉴到：

　　1.该课题应用TMT标记蛋白质组学技术手段，分析酒精性肝炎临床样本，以寻找具有标记性的差异蛋白。

　　2.围绕临床问题，根据患者对类固醇药物的不同反应进行对比分析，揭示多个蛋白群体所发生的变化，以及它们的潜在分子机制。进一步结合患者群体的实际临床结果，关联分析进一步挖掘具有潜在临床价值的生物标记物。

　　该文献所展示的工作是一项典型临床科研工作，基于蛋白质组学数据，结合实际临床问题。文献展示中的亮点是在多个大图中配备机制解释图，一定程度上易化了对于分子机制的理解，使读者相对容易接受对于数据的阐述。

 

　　参考文献

Hardesty,J.,Hawthorne,M.,Day,L.,Warner,J.,Warner,D.,Gritsenko,M.,Asghar,A.,Stolz,A.,Morgan,T.,McClain,C.,Jacobs,J.,&Kirpich,I.A.(2024).Steroid responsiveness in alcohol-associated hepatitis is linked to glucocorticoid metabolism,mitochondrial repair,and heat shock proteins.Hepatology Communications,8(3),e0393.doi:10.1097/HC9.0000000000000393.